[1]赖德辉,李逊,雷鸣,等.克隆与表达产甲酸草酸杆菌代谢基因Frc及临床意义[J].中华腔镜泌尿外科杂志(电子版),2010,(03):239-244.
LAI De-hui,LI Xun,LEI Ming,et al.Clinical significance of cloning and expression of frc of oxalobacter formigenes[J].,2010,(03):239-244.
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克隆与表达产甲酸草酸杆菌代谢基因Frc及临床意义(
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中华腔镜泌尿外科杂志(电子版)[ISSN:1006-6977/CN:61-1281/TN]
- 卷:
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- 期数:
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2010年03期
- 页码:
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239-244
- 栏目:
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- 出版日期:
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1900-01-01
文章信息/Info
- Title:
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Clinical significance of cloning and expression of frc of oxalobacter formigenes
- 作者:
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赖德辉; 李逊; 雷鸣; 曾国华; 袁坚; 吴文起; 何永忠; 何朝晖
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广州医学院港湾医院泌尿外科,510700，广州医学院第一附属医院泌尿外科,510230
- Author(s):
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LAI De-hui; LI Xun; LEI Ming; ZENG Guo-hua; YUAN Jian; WU Wen-qi; HE Yong-zhong; HE Zhao-hui
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- 关键词:
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产甲酸草酸杆菌; Frc; 基因克隆; 大肠杆菌BL-21
- 摘要:
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目的 研究产甲酸草酸杆菌草酸代谢基因Frc转化大肠杆菌BL21后稳定表达代谢草酸相关性酶--甲酰辅酶A转移酶(FCoAT)对草酸的降解效能.方法 成功培养产甲酸草酸杆菌后,采用PCR方法从产甲酸草酸基因组中获得Frc基因,克隆到pMDTM19-T载体上进行测序,得到正确的基因片段.经双酶切将目的 基因片段插入到原核表达载体PGEX-4T-2上,测序正确后,转化大肠杆菌BL-21,IPTG诱导表达GST-FCoAT融合蛋白,表达产物行western-blot鉴定分析.结果 重组克隆载体pMDTM19-Frc经测序鉴定序列正确.成功构建融合原核表达质粒PGEX-4T-2-Frc,大肠杆菌BL21成为载体,并稳定表达可溶性融合蛋白GST-FCoAT的同时获得代谢草酸潜能.结论 克隆产甲酸草酸杆菌Frc基因,成功构建PGEX-4T-2-Frc载体,并转化大肠杆菌BL21,能稳定表达可溶性融合蛋白GST-FCoAT,具有代谢草酸潜能,为肠道细菌获得代谢草酸潜能,减少胃肠道内草酸的吸收,降低尿液中草酸含量和临床防治草酸结石的研究奠定理论基础.
备注/Memo
- 备注/Memo:
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国家自然科学基金(30801140)；广东省科技厅资助项目(2009B080701026)；广州市卫生局资助项目(2008-YB-153)
更新日期/Last Update:
1900-01-01