[1]张剑文,刘炜,傅斌生,等.Fibulin-1蛋白的真核表达与ELISA检测方法的建立[J].中华腔镜泌尿外科杂志(电子版),2013,(06):56-59.
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Fibulin-1蛋白的真核表达与ELISA检测方法的建立()
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中华腔镜泌尿外科杂志(电子版)[ISSN:1006-6977/CN:61-1281/TN]

卷:
期数:
2013年06期
页码:
56-59
栏目:
出版日期:
2013-12-31

文章信息/Info

Title:
Establishment of ELISA for measurement of Fibulin-1 employing eukaryotic protein expression
作者:
张剑文; 刘炜; 傅斌生; 张彤; 郑明慧; 台艳; 杨扬; 张琪; 陈规划
中山大学附属第三医院器官移植中心，广州,510630，510630 广州,中山大学附属第三医院器官移植中心;510630 广州,广东省肝脏疾病研究重点实验室，中山大学孙逸仙纪念医院检验科，广州,510288，广东省肝脏疾病研究重点实验室，广州,510630
关键词:
Fibulin-1蛋白; 真核表达; 酶联免疫吸附测定
摘要:
目的 建立检测血清中Fibulin-1蛋白浓度的ELISA方法.方法 构建Fibulin-1蛋白真核表达载体,以人Fibulin-1基因编码序列为模板,将目的片段定向克隆入载体并转入毕赤酵母菌,进行Fibulin-1蛋白的真核表达.表达产物纯化后,Western blotting检测证明纯化的重组蛋白的抗原特异性.以该蛋白为定标绘制标准曲线,建立人血清ELISA检测方法并检测其精密度和回收率,最后初步分析人血清中Fibulin-1的含量.结果 从真核表达体系获得了纯化的Fibulin-1蛋白,其具有良好的抗原特异性;建立的ELISA方法线性相关系数R2=0.98,线性范围为12.5～800 ng/mL,检测灵敏度为6.25 ng/mL,蛋白回收率在94.33％～109.33％之间,CV均＜10％,具有良好的重复性;检测30例正常人血清样本中Fibulin-1的含量约为(31 ±8) μg/mL.结论 建立的ELISA方法可用于检测血清中的Fibulin-1蛋白含量.

备注/Memo

备注/Memo:
国家十二五科技重大专项课题(2012ZX10002017-005,2012ZX10002016-023,2012ZX10002010-001-007)；国家自然科学基金(81000936,81172036)；教育部博士点基金(20100171120107,20100171120084,20120171110082)；广东省自然科学基金(S2012010008792)；中山大学青年教师培育项目(10ykpy05)
更新日期/Last Update: 1900-01-01