[1]黄海,杜涛,黄健,等.高效抑制核因子κ-B的茎环RNA基因序列的获得[J].中华腔镜泌尿外科杂志(电子版),2009,(05):444-448.
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高效抑制核因子κ-B的茎环RNA基因序列的获得()
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中华腔镜泌尿外科杂志(电子版)[ISSN:1006-6977/CN:61-1281/TN]

卷:
期数:
2009年05期
页码:
444-448
栏目:
出版日期:
1900-01-01

文章信息/Info

Title:
The obtaining of shRNA sequences blocking the expression of nuclear factor kappa-B with hish quality
作者:
黄海; 杜涛; 黄健; 许可慰; 尹心宝; 林天歆; 江春; 韩金利; 郭正辉
中山大学附属第二医院泌尿外科,广州市沿江西路107号,510120
关键词:
核因子kappa-B; 前列腺癌; RNA干扰
摘要:
目的 获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa-B表达的shRNA序列. 方法根据核因子kappa-B基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3三条针对核因子kappa-B基因cds区的siRNA序列及无意义的对照序列,组建与之对应的4对互补的单链DNA序列,包括siRNA的正义链和反义链;正义链序列按5'向3'顺序依次为:酶切位点(BamH I)、干扰序列(19bp)、loop环(TTCAAGAGA)、干扰序列的反向互补序列(19bp)、中止信号(TTTTT)、酶切位点(EcoR I).将合成的序列插入空载体pSIHl一H1一copGFP shRNA Vector中,转染前列腺癌细胞后,通过real-time PCR检测不同序列片断对核因子kap-pa-B的mRNA抑制效果.结果 设计的3条针对核因子kappa-B的序列中第3条的抑制效果最好,目的 序列位于核因子KAPPA-B (NM_021975)的1096到1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCA TTCAAGAGA TGACG-TAAAGGGATAGGGC TTTTT G-3'.其对前列腺癌细胞株中核因子kappa-B的mRNA的干扰效率为59%,对其蛋白表达的抑制率为81%.转染细胞后,细胞可以稳定低表达核因子kappa-B.结论 成功获得高效抑制前列腺癌细胞株Lncap中核因子kappa-B表达的shRNA序列,为后期研究核因子kappa-B在前列腺癌发病中的作用机理等研究提供了基础.

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备注/Memo

备注/Memo:
广东省自然科学基金(001356,05100980,05300720)；广东省医学科学基金(A2008178)
更新日期/Last Update: 1900-01-01